肺炎支原体抗体血清学检测方法学 优劣势分析

发布时间:2017-10-02       作者:亚辉龙生物       来源:临床实验室        浏览:11024       收藏: 0

肺炎支原体(MP)是儿童社区获得性肺炎(CAP)的重要病原之一,占住院儿童CAP的10%~40%,肺炎支原体肺炎(MPP)好发于学龄前儿童。MP容易在人员密集的环境中发生,是经飞沫和直接接触传播,潜伏期为1~3周,每3~7年会出现地区周期性流行。

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肺炎支原体肺炎临床表现

肺炎支原体肺炎以呼吸系统的临床表现最为常见,而且以发热和咳嗽为主,中高度发热多见,如果婴幼儿出现明显的肺炎支原体肺炎,症状相对较重。其他系统表现常发生在起病2天至数周,包括(大约25%):对大环内酯类耐药的MP感染更易有其他系统表现;皮肤黏膜损伤常见;心血管系统受累亦较常见,多为心肌损害;血液系统以自身免疫溶血性贫血常见。


由于肺炎支原体肺炎的影像学表现并不典型,与小叶性肺炎、病毒性肺炎、细菌性肺炎相似;甚至会出现单纯性肺门淋巴结肿大型表现。

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肺炎支原体感染血清学规律:

人体感染肺炎支原体后,能产生特异性IgM和IgG类抗体。IgM类抗体出现早,一般在感染后1周出现,3~4周达高峰,以后逐渐降低。由于肺炎支原体感染的潜伏期为2~3周,当患者出现症状而就诊时,IgM抗体已达到相当高的水平,因此IgM抗体阳性可作为急性期感染的诊断指标。


如果患者有明显的症状,但检测IgM抗体阴性,则不能否定肺炎支原体感染, 很可能是感染过了急性期,而并非是没有感染肺炎支原体,此时就需检测IgG抗体。IgG较IgM出现晚,需动态观察,间隔2~4周的双份血清中检测到的抗体亚型转化或抗体水平呈4倍及4倍以上升高,可用于确诊肺炎支原体感染。如显著降低说明处于感染后期。IgG与IgM同时测定,可提高诊断率,达到指导用药、提高疗效。

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肺炎支原体实验室诊断: 


补体结合试验(CF):

原理:补体可和抗原抗体复合物结合,而游离的抗原或抗体则不结

合抗体。

利用已知抗原(抗体)和待检血清(抗原)反应后,加入补体进行反应,在指示系统(绵羊红细胞、溶血素)作用下,溶血则为阴性、不溶血则为阳性。

特点:约90%的MP患者呈补体试验阳性,灵敏度65%,特异性97%。

不足:1)生殖道MP及军团菌交叉反应;

2)特定疾病出现假阳性;

3)缺少抗体分型;

4)操作复杂、依赖经验、灵敏度低。


间接免疫荧光法(IFA):

原理:荧光素能和抗体蛋白分子结合而不使抗体失活,所以在抗原

与链接荧光素的抗体结合形成复合物时,能在荧光显微镜下观察到荧光,从而检测相应抗原。

不足:1)无通用标准;

2)主观判读结果;

3)自动化程度低;

4)检测时间长。


凝集法(冷凝集CA、明胶颗粒凝集试验PA)

原理:利用纯化的肺炎支原体抗原包被明胶颗粒,此致敏的明胶颗

粒将与人血清或血浆中的肺炎支原体抗体结合产生可见的凝集反应。

特点:应用明胶颗粒作为载体,从而消除了许多非特异性反应,灵

敏度比CF高。

不足:1)时间长:检测时间3h(静止凝集时间)以上;

2)不能区分IgG、IgM;

3)手工操作、主观判读、定性检测;

4)易受RF干扰。


酶联免疫吸附测定法(ELISA):

原理:抗原抗体的免疫学反应。

特点:可实现批量测定和半自动测定。

不足:1)时间长:至少100min出结果;

2)灰区比例高:10-20%的灰区占比;

3)灵敏度和特异性差。


直接化学发光免疫分析法(CLIA):

用化学发光剂直接标记抗原或抗体的免疫分析方法。常用于标记的化学发光物质有吖啶酯类化合物-acridinium ester(AE),是有效的发光标记物,其通过起动发光试剂(NaOH-H2O2)作用而发光。吖啶酯作为标记物用于免疫分析,其化学反应简单、快速、无须催化剂;检测小分子抗原采用竞争法,大分子抗原则采用夹心法,非特异性结合少,本底低;与大分子的结合不会减小所产生的光量,从而增加灵敏度。

特点:1)天然混合抗原,通过特殊包被方法,共价包被更高纯度

抗原表位成分,有效保证敏感性和特异性,同时可显著提高信噪比,更加有效区分阴阳性,大大减少可疑区间。

2)抗原包被在磁微粒表面,抗原表位得到充分的暴露,抗

原蛋白的结构为立体构象,抗体与抗原的结合为空间表位的结合,特异性更强。


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全国首家化学发光产品肺炎支原体检测产品:

联合检测:肺炎支原体IgG/IgM抗体分型检测,有效区分急性感染与既往感染;

检测速度快:30分钟出检测结果;

高灵敏度特异性:筛选多种原料选择最佳天然或重组抗原;利用生物素放大系统提高灵敏度;独特包被工艺的应用,增加灵敏度和特异性;

满足儿童微量采血检测需求:可以采用儿童微量采血标本检测,减少患儿痛苦,促进医患关系良性发展,避免免疫层析等现有全血检测试剂的检测不准确。


 深圳市亚辉龙生物科技股份有限公司 供稿


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